Barrett食管是指食管下段的鳞状上皮被柱状上皮覆盖，因为英国人Barrett首先报道，因此称Barrett食管，中文翻译为巴雷特食管。目前认为是获得性，可能与反流性食管炎相关，并有发生腺癌的可能。其症状主要是胃食管反流及并发症所引起的，胃食管反流症状为胸骨后烧灼感、胸痛及反胃。
现在，不需要患者新鲜组织，使用福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）样本，就能通过流式细胞术进行DNA含量检测，以帮助增生异常的诊断和风险分层。
在7月25日在线刊登于Gut的研究中，Dr.Won-TakChoi及其同事利用DNA流式检测了一批FFPE样品：80例HGD、38例LGD、21例IND、14例不存在增生异常。
在95.0％的HGD（高度增生异常）样品、21.1％的LGD（低度增生异常）样品、9.5％的IND（增生异常不明确）样品中均检测出DNA倍体异常，而无增生异常的样本中，DNA倍体均为正常二倍体。对于HGD，灵敏度为95％，相应的特异度为85％。
例1、无增生异常患者的DNA倍体为正常二倍体，不存在异倍体。例2、HGD（高度增生异常）患者，上面一行存在两个异倍体（蓝色和红色）、下面一行虽然没有异倍体，但G2/4N区比例6％，故判断为异常。研究人员指出，DNA倍体异常的存在与增生异常水平的增加相关。在LGD或IND患者中，通过单因素分析，如果存在DNA倍体异常，那么后续进展到HGD/食管腺癌的风险比分别为7.0和20.0。一旦诊断Barrett食管高度增生异常（HGD），通常需要切除或内镜消融治疗，DNA流式细胞术可以选择性地应用在不明确的HGD病例（基于组织学诊断困难的HGD病例），以确认HGD的形态学异常的真实性，还可以用在积极治疗前胃肠道病理学家之间意见不一致的情况下。
此外，DNA流式细胞术在LGD和IND样本中的应用，可以早期发现这些病例进展到HGD或食管腺癌的风险，从而可进行更频繁的内窥镜监测或消融治疗。
研究人员指出，除了相对简单和便宜之外，使用FFPE组织进行DNA流式细胞分析可以选取那些存在形态异常的区域，可提高阳性率，另外，也避免了流式细胞术和组织学以往需要分开单独活检的烦琐，简化了处理过程。
下面看具体的步骤。
具体步骤首先，对临床医生的取材还是有要求的，根据增生异常的面积大小，每个组织块切3～4片60um厚片。当然，这些组织都是送往病理科用福尔马林固定和石蜡包埋的。
以前，流式只能用测新鲜标本的DNA倍体，现在，只要将FFPE组织样品用％二甲苯脱蜡，接着通过乙醇到蒸馏水逐渐使之水化。然后将样品从活检袋中取出并置于10mLFalcon管中，在37℃下，用2mL1％胃蛋白酶（以PBS，pH1.5配制）中孵育1小时。孵育后，将样品剧烈涡旋以破坏所有结块的组织碎片。接下去，加入10mLNST/牛血清白蛋白（BSA）缓冲液（8.5gNaCl，1.2gTris碱，0.gCaCl2*2H2O，0.gMgSO4*7H2O、0.5gBSA溶解于1L无菌水中，pH7.8）终止胃蛋白酶反应。将样品通过80微米尼龙网过滤并通过在2℃下以rpm离心10分钟回收。将离心下来的细胞团块重悬于1mLDAPI工作液（4,6-二脒基-2-苯基吲哚）中，轻轻涡旋，并在-80℃孵育过夜。孵育过夜后，可能存在的粘连体用26号针强力抽吸吹打的方式使之解离。即可上机检测。
DAPI工作液的配制：将mLNST/NP-40/BSA缓冲液（1mLNP-40溶于1LNST/BSA缓冲液中）与mLmMMgCl2、10mgDAPI、mlDMSO混合即可。DAPI终浓度10μg/mL，DMSO终浓度为10％，这样配制出的是储存液，接着将储存液与NST/NP-40/BSA缓冲液＋10％DMSO以1:4稀释。
按照公开的临床DNA流式细胞术共识指南，DNA非整倍体定义为与正常DNA二倍体G0/G1峰独立分开的G0/G1峰。G2峰或4N位置（DNA指数为1.9-2.1）百分比大于6％由于与增生异常关系密切，也被归为异常。正常二倍体细胞的CV值和背景粘连体、碎片（BAD）的CV值分别为6.9％和9％，低于推荐的CV（8％）和BAD（20％）。
参考文献：ChoiW,TsaiJ,RabinovitchPS,etalDiagnosisandriskstratificationofBarrett’sdysplasiabyflowcytometricDNAanalysisofparaffin-embeddedtissueGutPublishedOnlineFirst:22June.
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